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      • α-酮戊二酸脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法
      產品名稱:

      α-酮戊二酸脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法

      產品品牌: 索萊寶 價格:
      廠商性質: 生產廠家 產品時間: 2020-08-13
      α-酮戊二酸脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法:α-KGDH(EC 1.2.4.2)廣泛存在于動物、植物微生物和培養細胞的線粒體中,是三羧酸循環調控關鍵酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脫羧生成琥珀酰輔酶A。
      α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和輔酶A生成琥珀酰輔酶A、二氧化碳和 NADH,NADH在340 nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。

      產品概述

      品牌SOLARBIO/索萊寶貨號BC0715
      規格100管/96樣供貨周期現貨
      主要用途α-KGDH酶活測定應用領域生物產業

      α-酮戊二酸脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法

      貨號:BC0715

      規格:100T/96S

      產品內容:

      試劑一:液體110mL×1瓶,4℃保存;

      試劑二:液體1mL×1支,-20℃保存;

      試劑三:液體22mL×1瓶,4℃保存;

      試劑四:粉劑×1支,4℃保存;

      試劑五:粉劑×1支,4℃保存;

      試劑六:粉劑×1支,-20℃保存;

      試劑七:粉劑×1支,-20℃保存;

      試劑八:粉劑×1支,-20℃避光保存。臨用前加入0.8mL雙蒸水充分混勻待用,用不完的試劑仍-20℃保存。

       

      工作液的配制:臨用前把試劑四、試劑五、試劑六、試劑七轉移到試劑三中混合溶解待用。

       

      產品說明:

          α-KGDH(EC 1.2.4.2)廣泛存在于動物、植物微生物和培養細胞的線粒體中,是三羧酸循環調控關鍵酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脫羧生成琥珀酰輔酶A。

          α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和輔酶A生成琥珀酰輔酶A、二氧化碳和 NADH,NADH在340 nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。

       

      需自備的儀器和用品

           紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、研缽、冰和蒸餾水。

       

      操作步驟:

      一、α-KGDH的提取

           稱取約0.1g組織或收集約500萬細胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑二,冰浴用勻漿器或研缽充分研磨,4 ℃ 11000 g離心10min,取上清,置冰上待測。

      α-酮戊二酸脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法

      二、測定步驟

      • 分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長340nm,蒸餾水調零。

      2. 空白管:

      取200μL工作液加入微量石英比色皿或96孔板中,37℃孵育5min后取出比色皿,再依次加入8μL試劑八和12μL蒸餾水,混勻并立即測量340nm處0s的吸光值A1,37℃準確反應2min,記錄340nm處2min時的吸光值A2,計算ΔA空白=A2-A1。

      3.測定管:

      取200μL工作液加入微量石英比色皿或96孔板中,在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)孵育5min后取出比色皿,再依次加入8μL試劑八和12μL樣本,混勻并立即測量340nm處0s的吸光值A3,37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)中準確反應2min,記錄340nm處2min時的吸光值A4,計算ΔA測定=A4-A3。

       

      三、α-KGDH活性計算

      a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

      (1)按樣本蛋白濃度計算

      單位的定義:每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

       α-KGDH活性(U/mg prot)=[(ΔA測定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反總×109]÷(Cpr×V樣) ÷T=1473.7×(ΔA測定-ΔA空白)÷Cpr

      (2)按樣本鮮重計算:

      單位的定義:每g組織在反應體系中每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

       α-KGDH(U/g 鮮重)=[(ΔA測定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反總×109]÷(V樣÷V樣總×W)÷T=1488.5×(ΔA測定-ΔA空白)÷W

      (3)按細菌或細胞密度計算:

      單位的定義:每1萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

      α-KGDH活性(U/104 cell)=[(ΔA測定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反總×109]÷(V樣÷V樣總×500)÷T=2.977×(ΔA測定-ΔA空白)

      V反總:反應體系總體積,2.2×10-4L;ε:NADH摩爾消光系數,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.012 mL;V樣總:加入試劑一和試劑二體積,1.01mL;T:反應時間,2min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣品質量,g;500:細菌或細胞總數,500萬。

       

      b.96孔板測定的計算公式如下

      (1)按樣本蛋白濃度計算:

      單位的定義:每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活性單位。

      α-KGDH活性(U/mg prot)=[(ΔA測定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反總×109]÷(Cpr×V樣) ÷T=2456.2×(ΔA測定-ΔA空白)÷Cpr

      (2)按樣本鮮重計算:

      單位的定義:每g組織在反應體系中每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活性單位。

      α-KGDH活性(U/g 鮮重)=[(ΔA測定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反總×109]÷(V樣÷V樣總×W)÷T=2480.7×(ΔA測定-ΔA空白)÷W

      (3)按細菌或細胞密度計算:

      單位的定義:每1萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活性單位。

      α-KGDH活性(U/104 cell)=[(ΔA測定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反總×109]÷(V樣÷V樣總×500) ÷T=4.962×(ΔA測定-ΔA空白)

      V反總:反應體系總體積,2.2×10-4L;ε:NADH摩爾消光系數,6.22×103L/mol/cm;d:96孔板光徑,0.6cm;V樣:加入樣本體積,0.012 mL;V樣總:加入試劑一和試劑二體積,1.01 mL;T:反應時間,2min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣品質量,g;500:細菌或細胞總數,500萬。

       

      注意事項

      • 測定過程中所有試劑和樣本在冰上放置,以免變性和失活。
      • 比色皿中反應液的溫度必須保持37℃或25℃,取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水,將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應過程中把比色皿連同反應液放在此燒杯中。
      • 兩個人同時做此實驗,一個人比色,一個人計時,以保證實驗結果的準確性。
      • 測定管的ΔA值在0.01-0.25之間,若測定管的ΔA值大于0.25,需將樣本進行稀釋。

      ?相關文獻:

      《Inhibition of?α?ketoglutarate dehydrogenase activity afects adventitious root growth in?poplar via?changes in?GABA shunt》 作者:Jianyun?Yue,Changjian?Du,Jing?Ji,Tiantian?Xie, Wei?Chen,Ermei?Chang, Lanzhen?Chen, Zeping?Jiang,Shengqing?Shi
       期刊:Planta 影響因子:3.06 PMID:
      《lncRNA Ftx promotes aerobic glycolysis and tumor progression through the PPARγ pathway in hepatocellular carcinoma》 作者:Xiao Li, Qi Zhao, Jianni Qi, Wenwen Wang ,Di Zhang ,Zhen Li, Chengyong Qin 期刊:International Journal of Oncology 影響因子:3.571 PMID:29845188
       

      α-酮戊二酸脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法訂購說明:

      1、絕大部分產品備有現貨,一般情況下都能訂貨當日發貨。 
      2、部分非常用產品,需提前1-2日預訂,海外期貨則需要提前3-6周預訂。 
      3、部分產品價格會因貨期、批次等因素發生變化,若有變動以訂貨當日新價格為準。 
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      α-酮戊二酸脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法

      運輸說明:

      極低溫產品:極低溫產品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產品包裹起來,再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產品的性質穩定如一,為您的實驗保駕護航。
      低溫產品:低溫產品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產品包裹起來,再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴實密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產品的性質穩定如一,為您的實驗保駕護航。
      常溫產品:常溫產品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產品由公司庫房人員快速配貨,準確快速高效的快遞保證產品快速送達您的手中。

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